DP117 Li-cor Revert™ 總蛋白染色試劑用戶指南

——精準(zhǔn)定量Western Blot總蛋白，提升實(shí)驗(yàn)可靠性的金標(biāo)準(zhǔn)工具

一、產(chǎn)品概述

DP117 Li-cor Revert™ 總蛋白染色試劑是一款基于膜（轉(zhuǎn)膜后）的標(biāo)準(zhǔn)化策略，專為Western Blot實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。該試劑可對(duì)樣品中的所有蛋白質(zhì)進(jìn)行染色，并通過Odyssey成像系統(tǒng)在700 nm通道中檢測，實(shí)現(xiàn)總蛋白的線性定量分析。相比傳統(tǒng)看家蛋白（如β-actin、GAPDH）歸一化方法，Revert™試劑可避免生物學(xué)變異的影響，顯著提高Western Blot定量分析的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。

二、核心參數(shù)與特性

產(chǎn)品優(yōu)勢：

1. 高線性范圍：

• 在1-60 μg總蛋白范圍內(nèi)提供線性信號(hào)，優(yōu)于看家蛋白（如β-actin在20 μg以上時(shí)信號(hào)飽和）。

• 示例：Jurkat細(xì)胞裂解液（10 μg/道）在4-12% Bis-Tris凝膠中分離后，Revert 700試劑在700 nm通道的信號(hào)強(qiáng)度與蛋白濃度呈強(qiáng)線性相關(guān)（R2＞0.99）。

2. 快速高效：

• 染色過程＜10分鐘，顯著縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間。

• 無需額外設(shè)備或特殊凝膠，可直接融入現(xiàn)有Western Blot流程。

3. 避免生物學(xué)變異：

• 總蛋白歸一化不受細(xì)胞類型、生長條件或發(fā)育階段的影響。

• 示例：小鼠不同組織（肌肉、心臟、脾臟）中β-actin表達(dá)差異顯著（CV=36.6%），而Revert試劑歸一化后數(shù)據(jù)一致性顯著提高。

三、應(yīng)用場景

1. Western Blot標(biāo)準(zhǔn)化

• 糾正上樣量或轉(zhuǎn)膜效率的差異，提高定量準(zhǔn)確性。

• 示例：通過Revert試劑歸一化后，不同樣本的目標(biāo)蛋白表達(dá)差異從原始數(shù)據(jù)的2.3倍降低至1.1倍。

2. 多組織/多細(xì)胞系比較

• 適用于跨組織或跨細(xì)胞系的蛋白表達(dá)分析，避免看家蛋白表達(dá)不穩(wěn)定導(dǎo)致的偏差。

3. 藥物篩選與機(jī)制研究

• 在高通量篩選中提供穩(wěn)定的總蛋白歸一化參考，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。

四、操作指南

（一）使用方法

1. 轉(zhuǎn)膜后處理

• 將轉(zhuǎn)膜后的PVDF或硝酸纖維素膜置于托盤中，用Q-water清洗3次，每次5分鐘。

2. 染色

• 加入Revert 700染色液，室溫孵育5-10分鐘（根據(jù)膜類型調(diào)整時(shí)間）。

3. 清洗

• 用Revert清洗液清洗3次，每次5分鐘，去除未結(jié)合的染色劑。

4. 逆轉(zhuǎn)

• 加入Revert逆轉(zhuǎn)液，室溫孵育5分鐘，終止染色反應(yīng)。

5. 成像

• 使用Odyssey CLx成像系統(tǒng)在700 nm通道掃描膜，獲取總蛋白信號(hào)。

（二）實(shí)驗(yàn)建議

（三）常見問題

1. Q：背景信號(hào)過高？
   A：檢查清洗步驟是否充分，或縮短染色時(shí)間。

2. Q：信號(hào)強(qiáng)度不足？
   A：確認(rèn)膜類型是否兼容，或延長染色時(shí)間至10分鐘。

3. Q：不同批次試劑信號(hào)差異大？
   A：確保試劑儲(chǔ)存條件（-20°C，避免反復(fù)凍融），并使用同一批次試劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

五、技術(shù)對(duì)比與選型建議

選型建議：

• 高精度需求：優(yōu)先選擇Revert 700試劑（貨號(hào)：926-11015），適用于700 nm通道成像。

• 多通道檢測：可搭配Revert 520試劑（貨號(hào)：926-11023）進(jìn)行520 nm通道成像。

• 經(jīng)濟(jì)型選擇：Revert Total Protein Stain Kit（貨號(hào)：926-11007）包含全套試劑，適合中小規(guī)模實(shí)驗(yàn)。

六、維護(hù)與儲(chǔ)存

1. 儲(chǔ)存條件

• -20°C避光保存，避免反復(fù)凍融（建議分裝后使用）。

• 有效期：自收到貨起2年。

2. 廢棄處理

• 廢棄試劑需按照實(shí)驗(yàn)室化學(xué)品處理規(guī)定進(jìn)行，建議收集在專用廢液容器中。