概述（Introduction）

細(xì)胞消化（Cell Dissociation）是細(xì)胞培養(yǎng)中的關(guān)鍵步驟，尤其在貼壁細(xì)胞傳代（Passaging）或細(xì)胞收獲（Harvesting）時。傳統(tǒng)的胰蛋白酶（Trypsin）雖然常用，但其動物來源（如豬或牛胰臟提取）可能導(dǎo)致批次間差異，且過度消化可能損傷細(xì)胞。

Thermo Fisher Scientific 的 TrypLE™ Express Enzyme (1X), Phenol Red-Free 提供了一種更溫和、穩(wěn)定且無動物來源（Animal-Origin Free）的替代方案。其不含酚紅（Phenol Red-Free）的配方適用于熒光顯微術(shù)（Fluorescence Microscopy）、流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cytometry）等對染料敏感的實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品特點(diǎn)（Key Features）

? 溫和高效：模擬胰蛋白酶活性，減少細(xì)胞應(yīng)激（Cell Stress），維持高存活率（Viability >90%）。
? 無動物成分（Animal-Free）：重組微生物蛋白酶（Recombinant Microbial Protease），避免病毒或朊病毒污染風(fēng)險。
? 不含酚紅（Phenol Red-Free）：避免干擾熒光檢測或光學(xué)實(shí)驗(yàn)。
? 即用型（Ready-to-Use, 1X）：無需稀釋，操作簡便，減少批次差異（Batch-to-Batch Consistency）。
? 廣譜適用性：適用于多種哺乳動物細(xì)胞（如HEK293、CHO、干細(xì)胞等）。

作用機(jī)制（Mechanism of Action）

TrypLE™ Express 含重組蛋白酶（Recombinant Protease），可特異性切割細(xì)胞表面黏附蛋白（如Integrins、Cadherins），促使細(xì)胞從培養(yǎng)表面解離。相較于傳統(tǒng)胰蛋白酶：

• 更穩(wěn)定：重組技術(shù)確保酶活性一致。

• 更溫和：減少過度消化導(dǎo)致的細(xì)胞損傷。

應(yīng)用場景（Applications）

?? 常規(guī)細(xì)胞傳代（Cell Passaging）
?? 原代細(xì)胞（Primary Cells）和干細(xì)胞（Stem Cells）消化
?? 3D細(xì)胞培養(yǎng)（如類器官Organoids、腫瘤球Spheroids）的解離
?? 流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cytometry）、qPCR等下游檢測

實(shí)驗(yàn)方案（Protocol）

貼壁細(xì)胞消化步驟（Adherent Cell Dissociation）

1. 去除培養(yǎng)基：吸盡培養(yǎng)液，用PBS輕柔洗滌1次。

2. 加入TrypLE™ Express：覆蓋細(xì)胞層（如1 mL/25 cm2）。

3. 孵育（Incubate）：37°C, 2-5分鐘（顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓后即可終止）。

4. 終止反應(yīng)：加入含血清培養(yǎng)基或PBS（比例≥1:1）。

5. 離心收集細(xì)胞：1000 rpm, 5分鐘，重懸于新鮮培養(yǎng)基。

優(yōu)化建議（Tips for Best Results）

?? 敏感細(xì)胞：可縮短孵育時間或用PBS稀釋TrypLE™ Express（如1:1）。
?? 避免過度消化：長時間作用可能降低細(xì)胞存活率。

與傳統(tǒng)胰蛋白酶對比（Comparison with Trypsin）