在細胞生物學研究、藥物研發以及毒理學評價等領域，準確評估細胞活力是探索細胞生理病理機制、篩選藥物活性成分、判斷化合物毒性的關鍵環節。CCK-8（Cell Counting Kit-8）細胞活力檢測試劑盒憑借其檢測原理、良好的性能優勢及簡便的操作流程，成為科研工作者常用的細胞活力檢測工具。
一、檢測原理
CCK-8 細胞活力檢測試劑盒的核心原理基于線粒體中的脫氫酶活性。在活細胞內，線粒體中的多種脫氫酶（如琥珀酸脫氫酶、蘋果酸脫氫酶等）能夠將外源性的水溶性四唑鹽 WST-8（化學名稱：2-(2 - 甲氧基 - 4 - 硝基苯基)-3-(4 - 硝基苯基)-5-(2,4 - 二磺酸苯)-2H - 四唑單鈉鹽）還原為橙黃色的甲臜（formazan）產物 。細胞活力與線粒體脫氫酶活性密切相關，活細胞數量越多、代謝越旺盛，線粒體脫氫酶活性越高，催化還原產生的甲臜量也就越多。生成的甲臜可直接溶解于細胞培養基中，其在 450nm 波長處具有特征吸收峰，通過酶標儀測定該波長下的吸光度值（OD 值），即可間接反映細胞數量與活力水平 。而死細胞由于線粒體功能受損，脫氫酶活性喪失，無法使 WST-8 發生還原反應，不產生或僅產生極少量甲臜。
二、產品性能優勢
（一）高靈敏度與準確性
CCK-8 試劑盒能夠檢測到低至幾十細胞的活力變化，對細胞數量的微小改變具有良好的響應性。其檢測過程中，甲臜生成量與活細胞數量在較寬的濃度范圍內呈現良好的線性關系 。例如，在細胞密度為 1×103 - 1×10?個 /mL 的區間內，吸光度值與細胞數量呈顯著線性相關，相關系數通?？蛇_ 0.98 以上，這使得科研人員能夠通過標準曲線準確推算樣本中的細胞活力與數量，為細胞增殖、凋亡等研究提供精確的數據支持 。與其他細胞活力檢測方法（如 MTT 法）相比，CCK-8 法生成的甲臜產物水溶性好，無需額外的溶解步驟，避免了因溶解導致的檢測誤差，進一步提高了檢測的準確性。
（二）操作簡便，節省時間
CCK-8 試劑盒的操作流程相對簡潔。實驗時，只需向培養的細胞中直接加入適量的 CCK-8 試劑，在細胞培養箱中孵育 1 - 4 小時（根據細胞類型和實驗條件調整），即可直接使用酶標儀測定吸光度 。無需像 MTT 法那樣，在反應結束后進行棄液、洗滌、溶解甲臜等繁瑣操作，極大地縮短了實驗時間，提高了實驗效率。對于大規模樣本檢測或高通量篩選實驗，CCK-8 法的操作簡便性優勢尤為明顯，能夠顯著減少實驗人員的工作量。
（三）良好的細胞相容性與安全性
CCK-8 試劑中的 WST-8 是一種水溶性四唑鹽，對細胞的毒性較低，在常規檢測濃度下，短時間內不會影響細胞的正常生理功能和代謝活動 。在連續多天使用 CCK-8 試劑對細胞進行活力檢測的實驗中，細胞的生長曲線未出現明顯異常，表明該試劑不會對細胞的長期培養和后續實驗產生顯著干擾 。此外，與含有有機溶劑（如 DMSO）的 MTT 法相比，CCK-8 法無需使用有機溶劑溶解甲臜，減少了有機溶劑對細胞的潛在毒性作用和對實驗人員健康的危害，同時也降低了實驗操作過程中的安全風險。
（四）適用范圍廣
CCK-8 試劑盒適用于多種類型細胞的活力檢測，包括貼壁細胞（如 HeLa 細胞、HepG2 細胞）、懸浮細胞（如 Jurkat 細胞、K562 細胞） ，以及原代細胞（如原代神經元細胞、原代肝細胞）。無論是哺乳動物細胞，還是昆蟲細胞等其他物種來源的細胞，均可采用該試劑盒進行活力評估。在實驗應用方面，可用于細胞增殖實驗，監測細胞在不同培養條件或藥物處理下的生長情況；也可用于細胞毒性檢測，評估化學物質、納米材料、病毒等對細胞活力的影響；還可用于細胞凋亡研究，判斷細胞在特定刺激下的死亡比例 。
三、實驗操作流程與注意事項
（一）實驗操作流程
細胞接種：根據實驗目的，將處于對數生長期的細胞用胰酶消化后，調整細胞懸液濃度，接種于 96 孔細胞培養板中，每孔接種體積通常為 100 μL，細胞接種數量根據細胞類型和實驗要求確定，一般為 1×103 - 1×10?個 / 孔 。將培養板置于細胞培養箱中（37℃，5% CO?），培養 24 小時，使細胞貼壁或適應懸浮培養環境。
藥物處理（如需）：若實驗涉及藥物處理，在細胞培養 24 小時后，向各孔中加入不同濃度梯度的藥物溶液，同時設置空白對照組（只加培養基）和陽性對照組（加入已知具有細胞毒性的藥物），每組設置 3 - 5 個復孔 。將培養板繼續置于細胞培養箱中孵育相應時間（根據實驗設計確定，一般為 24 - 72 小時）。
加入 CCK-8 試劑：孵育結束后，每孔加入 10 μL CCK-8 試劑，輕輕振蕩培養板，使試劑與培養基充分混勻 。將培養板放回細胞培養箱中，繼續孵育 1 - 4 小時。在此過程中，可每隔 1 小時觀察一次，當甲臜顏色達到合適深度且吸光度值處于檢測線性范圍內時，停止孵育。
吸光度測定：使用酶標儀在 450nm 波長處測定各孔的吸光度值（OD 值）。若樣本背景值較高，可同時測定 600 - 650nm 波長處的吸光度值，用 450nm 處的 OD 值減去 600 - 650nm 處的 OD 值，以消除背景干擾 。
（二）注意事項
細胞狀態把控：確保用于實驗的細胞處于良好的生長狀態，選擇對數生長期的細胞進行接種，避免使用老化或生長異常的細胞，否則會影響細胞活力檢測結果的準確性 。在細胞傳代過程中，嚴格控制傳代次數，一般建議在 10 代以內使用。
試劑使用規范：CCK-8 試劑應避光保存于 4℃冰箱中，使用前需平衡至室溫。避免試劑反復凍融，以免影響 WST-8 的活性 。使用時，盡量減少試劑在空氣中的暴露時間，防止被氧化。
孵育條件優化：CCK-8 試劑的孵育時間會因細胞類型、細胞密度和代謝活性的不同而有所差異。對于代謝較慢的細胞，可能需要適當延長孵育時間；而對于代謝旺盛的細胞，孵育時間可適當縮短 。在進行新的細胞系檢測或開展預實驗時，建議設置不同的孵育時間梯度，確定最佳孵育時長。
避免干擾因素：實驗過程中，應避免使用含酚紅的培養基，因為酚紅在 450nm 波長附近有吸收峰，會干擾甲臜的吸光度測定 。若必須使用含酚紅的培養基，需設置空白孔（只加培養基和 CCK-8 試劑）進行對照，以扣除酚紅的影響。此外，一些具有還原性的化合物（如維生素 C、DTT 等）可能會與 WST-8 發生反應，導致吸光度值異常，在藥物處理實驗中需注意藥物成分對檢測結果的潛在干擾。
CCK-8 細胞活力檢測試劑盒憑借其科學的檢測原理、突出的性能優勢和便捷的操作流程，為細胞活力評估提供了可靠的解決方案。在生命科學研究與生物醫藥領域，合理運用該試劑盒能夠幫助科研人員更準確地獲取細胞活力數據，推動相關研究的深入開展。
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